自身免疫病与自身抗体的检测ppt课件.ppt

自身免疫病与自身抗体的检测,免疫 机体识别和排除抗原性异物的功能，也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生的以排除抗原为目的的生理过程。,抗原性异物： 引起过敏反应：花粉、食物和药物; 病原微生物及其毒性产物; 衰老退变的细胞及偶尔出现的癌变细胞。 有利：通过对这些抗原性异物的识别和清 除，机体才能保持相对的自身稳定。 不利：免疫识别也可针对自身成分，引起超敏反应和自身免疫病等。,免疫保护：一般情况下，免疫应答的结果是产生抗体或致敏淋巴细胞， 具有抗感染、抗肿瘤等对机体有利的效果。,免疫耐受现象 天然耐受：1945年OWEN发现异卵双生的两只小牛虽然自体内的红细胞血型不同、抗原性不同，但在对方体内却不引起免疫反应。 胚胎期接受异型抗原刺激免疫耐受； 宿主淋巴细胞有识别“自己”与“非已”的能力。,诱导免疫 1953年Billingham等人企图证明是否机体在免疫成熟前引入异物可作为“自己”成分加以识别； 用遗传不同的纯系小白鼠的淋巴细胞注入另一纯系胚胎鼠内，在出生后发育为成体时，可接受供体的皮肤移植，而不产生移植排斥反应。,隐蔽抗原：机体有些组织成分由于解剖位置的特殊性，正常情况下终生不与免疫系统接触，称为隐蔽抗原。例如：眼晶状体、葡萄膜和精子等都是隐蔽抗原。机体不能建立对这些组织的免疫耐受性。出生后，由于感染或外伤等原因，隐蔽抗原被释放出来，与免疫系统接触便能诱导相应的自身免疫应答，而导致自身免疫病的发生。如交感性眼炎等。,自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致敏淋巴细胞的现象。 自身免疫发生的原因： 1、机体抗原特异性淋巴细胞发生异常，对正常组织发生免疫应答状态； 2、 机体自身组织成分发生改变从而引起的免疫应答状态。,自身免疫病： 是指在各种内外因素的作用下，自身免疫反应过强，超过了生理性自身免疫反应的强度且持续相当长时间，造成对正常细胞、器官的功能与结构的破坏，呈现与此损伤相关的临床表现及免疫学异常。,微弱的自身免疫并不引起机体的病理性损伤，在许多正常人血清中可发现多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞，但在严格的限制范围内（免疫自稳），这种自身免疫现象随着年龄递增而愈加明显，在70%以上的正常老年人血清中可查出自身抗体，这些低滴度的自身抗体能促进体内衰老蜕变的自身成分（自身抗原）的消除，以执行免疫稳定与免疫监视的任务，所以说：自身免疫反应是免疫系统正常生理功能的重要组成部分。,自身免疫病的基本特征自身免疫病的病因不祥，有些自身免疫病的发生和复发似与某些外因有关，但大多数自身免疫病似乎是“自发”地发生的，致少目前未找到肯定的有关外因。,自身抗体和血液中可检出高滴度的（或）与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞。,患者组织器官的病理特征为免疫炎症，并且损伤的范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对应。 1、器官特异性自身免疫病：如桥本氏甲状腺炎，血液中可检出高滴度的抗甲状腺球蛋白抗体-只损伤患者甲状腺。 2、非器官特异性自身免疫病：如系统性红斑狼疮（SLE），血液中可检出多种自身抗体，损伤并非局限于某一器官系统，病理损伤广泛。,自身免疫病的发生与多因素相关，包括遗传因素、性别差异、年龄大小、气候环境及地理位置等。,遗传因素： 强直性脊柱炎（AS）患者90%为HLA-B27阳性，然而在HLA-B27阳性的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为2%，而第一级HLA-B27阳性的亲属中，发生强直性脊柱炎的危险性达20%。,系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率也较高，在SLE第一代亲属中发病率达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵双胎更为常见 。在1980年的调查中35组单卵双胎的患者中，有22组患SLE，共患病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1组患病，为12.5%。,性别差异和年龄大小： 强直性脊柱炎（AS）多见于年轻男性，其发病年龄从4-90岁不等，但以15-20岁多见，男女比列为9-10:1，但最近有人调查发现男女比列约为1.5-3:1，只不过女性 强直性脊柱炎患者起病缓慢，病情较轻，易被误诊。,系统性红斑狼疮（SLE）是最常见的自身免疫性疾病之一，发病的男女比列为1:9，在生肓年龄甚至可高达1:30，而且多发生于20-40岁的孕龄妇女。 许多患者因妊娠或分娩发病、加重,这就提示了内分泌对病情影响至关重要，妊娠期妇女由于内分泌发生变化，雌激素水平升高，导致CD4细胞（T辅助细胞）功能增强，CD8细胞（T抑制细胞）功能减弱，有利于引起免疫应答，产生抗体。,气候环境及地理位置： 自身免疫性疾病与气候环境、地理位置及种族等有关，以系统性红斑狼疮（SLE）为例，其在美国黑人的发病率是白人的3倍，但非洲黑人SLE的患病率并不高，中国人患病率也明显高于其它东方国家与西方人，这就提示了SLE的发病有种族遗传性。,SLE在不同种族中的发病率,国 籍 发 病 率（/10万人） 瑞 典 39.0 芬 兰 28.0 中国 24.1 菲律宾 19.9 日本 18.2 印第安 16.0 美国黑 人 10.54 夏威夷 5.8,自身免疫病在血清学检查时呈现交叉重叠现象： 如：桥本氏甲状腺炎患者血清中不仅有高滴度的抗甲状球蛋白抗体，同时常可检出抗胃壁细胞抗体，且甲状腺炎的患者患自身免疫性恶性贫血症的机会也较正常人高得多。反之，患胃的自身免疫病（自身免疫性萎缩性胃炎）而致恶性贫血症的患者中，部分人有抗甲状腺球蛋白抗体，而且他们患自身免疫性甲状腺炎的机会也确实比正常人高得多。,大多数自身免疫病呈现出发作缓解复发缓解迁延的临床特征，以致成为终身痼疾。,如：SLE是一种慢性、全身性疾病，病变往往是症状加重与缓解交替出现，缓解可持续多年，但常因感染、感冒、阳光暴晒、酗洒、过度劳累、妊娠等因素导致疾病发作。少数病人因激素使用不当，撒药过快或突然停药引起复发，疾病每发作一次，受累的器官，特别是肾脏的损伤就加重一次，最后可导致肾功能不全、肾衰而死亡。,免疫抑制剂（肾上腺皮质激素、环磷酰胺）治疗有一定疗效，但副作用与不良反应严重，停药后常易复发。,SLE的预后以下列因素有关： 发病经过、内脏损伤的类型与程度、诊断与治疗的早晚、治疗措施是否正确、有无合并症、发病的年龄、性别、妊娠及患者的自我保护意识、配合治疗等密切相关。,在60年代以前，SLE患者2年死亡率为50%以上，5年死亡率达90%以上。主要死亡原因依次为肾功能衰竭、继发感染、心肺病变、血液系统和中枢神经系统病变。 随着科学技术的进展，检测技术的不断完善，早期诊断率得到了很大的提高，治疗有力、得当，SLE的预后有了很大的改观，10年存活率达85%以上，病程最长的已达50多年。,自身免疫病的分类,按疾病累及的系统区分：,结缔组织疾病：如：SLE、RA等。消化系统疾病：如：自身免疫性慢性活动性肝炎（AIH）、 PBC等。生殖系统疾病：如：习惯性流产、子宫内膜异位症等。神经肌肉疾病：如：全植物神经功能不全、重症肌无力等。泌尿系统疾病：如：肾小球基底膜肾炎、原发性IgG肾病等。,内分泌系统疾病：如：1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎等。血液系统疾病：如：自身免疫性溶血性贫血、原发性血小板 减少性紫癜等。心血管系统疾病：如：风湿热、病毒性心肌炎与心肌病等。呼吸系统疾病：如：特发性肺间质纤维化等。,五官科相关疾病：如：交感性眼炎、晶体过敏性葡萄膜炎等。皮肤组织疾病：如：寻常天疱疮、类天疱疮等。,按抗原成分的分布范围分：,器官特异性自身免疫病（局限性自身免疫病） 其自身抗原常为某一器官的特定成分，所产生的自身抗体或/和致敏淋巴细胞也主要是针对此特定的自身组织，病变范围严格限制在该器官及所及的范围。如：1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎等。,器官非特异性自身免疫病（系统性自身免疫病） 其自身抗原则为细胞核或细胞浆成分，如组蛋白或线粒体等，病变可侵犯全身各器官系统，损伤并非局限于某一器官系统，病理损伤广泛，体内有多种自身抗体，其中有些自身抗体可与所有细胞核成分（如DNA）起反应。如：SLE。,中间型的自身免疫病 实际上，在器官特异性自身免疫病与器官非特异性自身免疫病之间，还存在一些中间型的自身免疫病，如原发性胆汁性肝硬化（PBC）就极为典型。本病的小胆管是免疫损伤的主要靶器官，但血液中的自身抗体(AMA)却不只对肝脏具有特异性，而是能攻击所有细胞的线粒体,自身免疫病按其发病时有无诱因可分：原发性自身免疫病（特发性自身免疫病） 这类疾病的发生很难找到明确具体的环境因素，是自身免疫病的主体。,继发性自身免疫病 这类疾病的发生常有比较明确具体的原因，如外伤后交感性眼炎，外伤后睾丸炎所致的男性不肓症等。,自身抗体的检测 自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。,自身抗体是自身免疫病的重要标记，每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体谱，某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性，已成为诊断某些疾病的血清标记抗体或特异性抗体，某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，个别的自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。,自身抗体检测的临床意义有助于自身免疫病的早期诊断；有助于判断疾病的活动性和预后，观察治疗反应，指导临床用药；有助于进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制。,自身抗体的检测方法,免疫荧光标记法：原理：将抗体（免疫球蛋白）或抗原与荧光素结合，而不失其抗体（或抗原）活性，成为具有特异性的荧光抗体（或抗原）试剂。当浸染标本中含有特异性的抗原（或抗体）时，就会在抗原和抗体结合部位发出亮绿色荧光。依其荧光强度制定加号，阴性则无特异荧光。,直接荧光染色技术（DIF）原理：荧光标记抗原或抗体，直接与相应抗体或抗原结合，则抗原和抗体结合部位发出亮绿色荧光，为特异性结合。方法特点：免疫荧光直接法，特异性强；只能检测一种抗原或抗体；适用于细菌抗原和病毒抗原检查；,间接荧光染色技术（IIF）原理：病人血清中的抗体与基质片中的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再加荧光标记的抗体，则荧光标记抗体与抗原抗体复合物结合发出亮绿色荧光。,基质片+病人血清-抗原抗体复合物+荧(抗原） （抗体）光标记的抗体-抗原抗体复合物-荧光标记的抗体,方法特点： 既可定位和鉴定抗原，还可测未知抗体，这就扩大了免疫荧光技术的应用范围。 荧光标记抗体可以示踪抗原和抗体结合位置，显示了方法的敏感性，因为一个抗原单位可以结合很多抗体单位，如果每个抗原单位可结合5个抗体单位，而每个抗体单位又可结合5个荧光抗体单位的话，则细胞内的抗原是以25倍的荧光物质显示出来。,酶联免疫吸附试验(ELISA）间接法测抗体原理：用纯化的抗原包被微孔板，检测相应的抗体。,放射免疫法(RIA）原理：病人血清中的抗体（或抗原）与同位素标记的抗原（或抗体）结合形成抗原抗体复合物，测量结合或游离的同位素的放射性，即标志血清中抗体或抗原的浓度。,金标免疫斑点法原理：斑点反应板上固相纯化抗原与血清中抗体形成复合物，胶体金标记抗人IgG单抗与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑点。本法用于快速检测血清中抗体。,免疫印迹法(IB）原理：以ENA分型为例，用SOS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，将ENA按分子量大小予以分离，再将其转移至硝酸纤维薄膜，如果受检血清含有相应抗原的自身抗体，则在相应位置会发生免疫反应，再加酶标抗体，底物，显色液和终止液，在抗原抗体反应的位置出现显色带，与标准带相比较。,颗粒凝集法(PA）原理：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗DNP抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙烯乳胶，制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂，当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶颗粒上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。,对流免疫电泳法(CIE）原理：对流免疫电泳又名免疫电渗电泳，实际上是加速免疫扩散技术。因抗原大多数是属蛋白质，而蛋白质是一种两性电解质，在碱性溶液中带负电荷，因此在电泳时从负极向正极移动。而抗体大部分属IgG，分子量大，泳动较慢，在碱性溶液中不带电荷或带少量负电荷。同时由于琼脂的电渗作用，在电泳中使抗体由正极向负极移动。这样使抗原和抗体定向对流，两者相遇后，在比例合适处形成可见沉淀线。,免疫双扩散(DID or ID） 原理：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可以作出抗体的检测。,免疫沉淀法(RIP）斑点酶免疫渗透试验(DIEFA）斑点酶免疫结合试验(DIGFA),风湿免疫病常规实验室检查一般临床检验常规检查血常规RA：80%贫血，活动期PLT升高。SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。免疫血管炎：WBC增高。对药物骨髓抑制的监测。尿常规SLE：尿蛋白及RBC表明肾损伤。,生化常规检查肝功能：如有异常，应鉴别是何种性质（自身免疫肝病？）肾功能：免疫肾病（SLE？血管炎？）肌酶：多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）尿酸：痛风？,免疫血清学检查免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的血症）。ESR、CRP（急性期蛋白）：对病情活动性的判断。CH50、C3、C4：SLE活动期均降底。ASO：链球菌感染，风湿热。自身抗体的常规检查,病原感染常规检查肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGVEBV,TB,抗核抗体谱(ANAS）的检测,抗核抗体(ANA）是自身抗体中的一组抗体。ANA的研究，从发现狼疮(LE）细胞算起，迄今40多年来，人们对ANA的认识不断加深，已衍生出具有不同临床意义的二十余种ANA，形成了抗核抗体谱(ANAS）。这些抗体对风湿性疾病，尤其是结缔组织病的诊断，鉴别诊断和临床治疗有重要帮助。,抗核抗体：传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。现代主义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。 对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸和核蛋白。,靶抗原分布： 细胞核 细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期,抗核抗体的分类：根据细胞内靶抗原分子的理化特性核分布部位，将ANA分为： 抗DNA 抗体(anti-ds- DNA, anti-ss- DNA 抗组蛋白抗体 （ihistons：,H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B复合物 ） 抗ENA抗体（抗体： Sm、NrNP、SSA/RO、SSB/La 抗非组蛋白抗体 rRNP、SCL-70、PCNA、RA33） 抗着丝点抗体（ACA） 抗核仁抗体(抗体：RNA-Polymerase-1, PM-SCL/PM-1.) 抗其他细胞成分抗体（高尔基体、中心体、纺锤体、线粒体、溶酶 体、肌动蛋白、 Vimrntin、细胞角蛋白、Lamin）,ANA,抗核抗体(ANA)的检测 在实际工作中，不管用何种方法来检测ANA，实际上都是指总抗核抗体检测。ANA阳性的疾病很多，最常见于弥漫性结缔组织病，某些非结缔组织病也可阳性（如慢性活动性肝炎、重症肌无力、慢性淋巴性甲状腺炎等），正常老年人也可出现低滴度的ANA阳性（见表）。ANA阳性标志了自身免疫性疾病的可能性，ANA检测在临床上是一个极重要的筛选试验。,抗核抗体(ANA)的阳性率SLE 95%PSS 70-80%MCTD 95%SS 60-70%PM/DM 50-60%RA 20-30%自身免疫性肝炎 80-90%正常人 5-20%,间接免疫荧光法（IIF）： ANA无器官特异性和种属特异性，大部分属IgG类，仅少数为IgM、IgA。目前常用间接免疫荧光法（IIF）作为总的ANA的筛选试验。IIF检测ANA时，所用抗原底物片的种类甚多（见表)，目前广泛应用的是核质丰富的培养细胞片或动物器官组织冰冻切片。,ANA检测常用底物细胞片,对底物片的要求 ： 对底物片的选择要便于ANA检测结果观察（免疫染色模型）， 底物片所含抗原应种类丰富、特异性强、含量高，否则就失去了ANA筛选检测作用。,两种不同底物检测ANA的阳性率比较疾病 Hep-2细胞 冰冻切片SLE 99% 96%SS 85% 72%PSS 88% 40%RA 55% 24%JRA 40% 22%,由于不同底物因其含抗原的不完全相同，所以可能出现同一份标本在不同的底物片上测定ANA时产生不同的结果，如鼠肝上SSA的含量只有Hep-2细胞的1/10，造成含SSA抗体阳性血清在 鼠肝底物上呈阴性反应，而于Hep-2细胞为底物则呈阳性；,抗着丝点抗体（ACA）、抗PCNA抗体只与细胞活跃增殖的细胞核抗原反应，用Hep-2等组织培养细胞可以检出，而 鼠肝细胞增殖分裂不活跃，则不能检出。这就说明检测ANA其底选择尤为重要。现已证明人细胞培养底物检测ANA敏感性优于动物组织底物片。目前国际、国内都通常采用Hep-2细胞作为ANA检测底物。,文献报道，应用Hep-2细胞来检测ANA较鼠肝（肾）冰冻切片检测ANA，阳性率可提高10-20%左右。,ANA检测IIF法 90%以上实验室使用Hep-2细胞为底物; 为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据有核大、细胞结构清晰特点； 便于结构观察及荧光染色核型分析； 核抗原丰富、特异性强、有完整的ANAs；抗原谱(细胞核、浆、骨架、周期）； 可预测分析ANA靶抗原范围； 经验性强。,IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型斑点型 高尔基体 中间体型核仁型 溶酶体型着丝点 颗粒型（粗、细）PCNA型核（多、少）点型,IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 周边型或核膜型（M）：荧光染色在核膜周围，此型与抗ds-DNA抗体有关。 均质型（H）：核质染色均匀一致，此型与抗组蛋白抗体，抗DNA抗体有关。,斑点型（S）：核质染色呈斑点状，抗可溶性核抗原（ENA）抗体常呈此种染色模型。 核仁型（N）：核仁着染荧光，此型针对核糖体、U3-RNP、RNA聚合酶等抗体多为此型。,着丝点型（ACA）：此型核内均匀散布大小一致的着染荧光斑点，相关抗体为抗着丝点抗体，在鼠肝冰冻片为底物时不易检出，须以培养细胞为底物方可检出。 PCNA型：在与Hep-2细胞为底物时，荧光染色只在生活周期的幼稚细胞核呈显著的斑纹染色而邻近细胞核为阴性反应。此型由抗增殖期细胞抗体引起。,关于IIF法检测ANA荧光染色模型应注意 1、 一种抗体可出现不同的染色图型，不同的抗体亦可出现同样的染色图型。 2、有些染色图型对ANA的判断有特异性，如：ACA、PCNA、抗高尔基体等。,3、有些染色图型有一定的提示作用，但仅根据染色图型特点来推断抗体的特异性是危险的。 4、有时一份血清内因含有多种抗体可出现不同的染色图型，用不同稀释度的血清检测，可分清各种荧光染色图型。,ELISA法检测ANA原理：利用ELISA法，搜集细胞核和细胞浆抗原，如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板，检测抗核抗体。,方法学评价 自1957年Friou等首先用IIF法检测抗核抗体以来，许多研究者对ANA检测进行了大量研究，但事实证明，只是在IIF法改良上有些进展，如底物选择及其制备方法改良等。,ELISA法与IIF法比较，有操作简便，结果判断较客观，无需荧光显微镜等优点，现在一些医院用ELISA法来作检测ANA的筛选方法。由于ELISA法检测ANA时，要复制细胞抗原的全部成分，这些抗原在细胞内存在时相互间的浓度及自然抗原决定簇的二级结构及高级结构是极其困难的，所以从目前来看，应用组织培养细胞底物的IIF法仍然是检测抗细胞内抗原自身抗体的“金标准”。,红斑狼疮细胞（LE-cell）的检查LE细胞SLE诊断标准中实验指标之一（ARA，1982）方法：3ml血液-放置30分钟-用竹竿捣碎-置37度水浴箱1小时-离心-取WBC层涂片染色-镜检。,原理 LE因子是DNA组蛋白抗体（抗DNP抗体），当病人血清中的这种抗核抗体在补体辅助下，与轻微受损伤（血液用玻璃珠冲撞或凝血后被捣碎）的白细胞核内的DNA组蛋白复合物（DNP）起作用时，而形成均质体（LE小体），均质体再被中性粒细胞所吞噬并将细胞核推向一边，即形成典型的LE细胞。涂片中还可见到游离的LE小体或其周围有多核粒细胞现象。,形成因素：（1）、ANA（LE因子），（2）、损伤的白细胞，（3）、补体，（4）、有活跃吞噬功能的多形核细胞。,LE因子： DNA组蛋白抗体（抗DNP抗体）LE细胞检查：操作复杂，耗时费力，特异性、敏感性差，阳性率低。1994年美国临床病理家协会（ASCP）LE细胞检查：过时、废弃的实验。替代试验：抗DNP抗体 抗核小体抗体 ANA 抗dsDNA抗体 抗sm抗体。,抗DNP抗体的检测-乳胶凝聚法原理 从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白（DNP）抗原，致敏聚苯乙烯乳胶，制成抗DNP抗体乳胶凝聚试剂，当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶颗粒上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相互凝聚出现肉眼可见的凝聚颗粒。根据凝聚反应强弱判断阳性强度。,临床意义 正常人无此抗体，阳性时主要见于SLE，SLE活动期阳性可达80-90%，非活动期阳性率为20%左右。其它结缔组织病等阳性率低，且部分病人合并SLE症状，某些非结缔组织病（如肝炎等）偶见阳性。抗DNP抗体乳胶凝聚试验为SLE的十分重要的过筛试验。阳性，特别是（+）以上时要高度考虑为SLE诊断，阴性结果时，SLE的诊断要慎重。,方法学评价 抗DNP抗体乳胶凝聚试验又称LE因子试验，该试验敏感性、特异性均高于传统的LE细胞检查方法，且操作简单、快速，可作为LE细胞检查替代试验，是SLE诊断及病情观察的一项重要参考指标。,抗DNA抗体的检测抗DNA抗体的分类及临床意义抗DNA抗体分为：（1）、抗单链DNA抗体（抗ss-DNA），（2）、抗双链DNA抗体（抗ds-DNA），（3）、抗z-DNA抗体。,（1）、抗ss-DNA抗体：对疾病诊断缺乏特异性，虽然SLE病人中其阳性率为70%，但也可以在多种风湿性疾病或非风湿性疾病中出现，正常老年人也有抗ss-DNA抗体，故临床上无实用价值。,（2）、抗ds-DNA抗体：主要见于SLE，阳性率在50%左右，其中阳性者90%以上为活动期患者，而在非SLE患者和正常人则多为阴性。有时其它结缔组织病患者抗ds-DNA抗体也可阳性，如SS、DLE、MCTD等，但阳性率低，一般10%，抗体效价也较低，且此类病人一般认为是SLE重叠综合症。由于抗ds-DNA抗体对诊断SLE有较高的特异性，因此是目前公认的SLE血清标记性抗体，被列为SLE诊断标准之一。,抗ds-DNA抗体与SLE疾病活动性关系密切，其抗体效价随疾病的活动或缓解而升降，活动期增高，缓解期降低甚至转阴。因此抗ds-DNA抗体常被作为SLE活动的指标，可用做监视SLE病情变化，药物治疗效果等。,抗ds-DNA抗体在SLE的发病机理中起重要作用，SLE并发的肾炎（狼疮性肾炎）是由抗ds-DNA抗体介导的一种免疫复合物病。抗ds-DNA亦可形成多种冷沉淀而致血管炎。该抗体的存在易引起SLE肾炎和典型的蝶形红斑。,（3）、抗z-DNA抗体：对SLE有很高的特异性，临床意义同抗ds-DNA抗体相似。因其对应抗体的构象（非天然的左双螺旋DNA），抗原纯化困难，故未应用于临床检测。,2、抗ds-DNA抗体的检测 抗ds-DNA的检测方法很多，目前临床常规检测广泛应用的方法有，间接荧光法（IIF），放射免疫分析法（RIA），金标免疫斑点法，酶联免疫吸附试验（ELISA）等。,（1）、间接免疫荧光法（IIF） 常用底物基质片有：马疫锥虫（TE）和短膜虫（CL）两种。原理 以马疫锥虫（TE）和短膜虫（CL）为抗原底物，利用虫体内含有纯ds-DNA动基体和核的生物学特性进行间接荧光测定。是目前国内外临床常规检测抗ds-DNA最常用的方法。,方法学评价 IIF法采用感染的小鼠血涂片或人工培养的CL涂片做抗原底物，故抗原基质片制备困难。马疫锥虫需在小鼠内传代，使用不便，短膜虫法需培养及虫种传代保存，长期传代操作不当，易于污染。,（2）、胶体金标记法（3）、放射免疫法（RIA又称Farr法）（4）、ELISA法,疾病 TE-IIF 、CL-IIF法 FARR 法 ELIS法SLE 52% 47 % 62%SLE活动期 96% 94% 68%SLE非活动期 10% 5 % 29%结缔组织病 3% 3% 20%非结缔组织病 0 % 2 % 13% 正常人 0 % 0% 7%,IIF法、 FARR 法、和ELISA法检测 ds-DNA阳性比较,抗ENA抗体检测的临床意义 ENA是盐水可提取核抗原的英文缩写，表明该部分核抗原可溶于盐水。目前发现的其相应抗体已有十余种，不同的抗ENA抗体在各种结缔组织病中阳性率有明显异，有些有很高的特异性，有助于结缔组织病的诊断和监别诊断。,1、抗Sm抗体 抗Sm抗体仅发现于SLE中，被视为SLE的标记抗体。用免疫双扩散法检测，阳性率为30%，此阴性并不能排除SLE诊断。相对抗ds-DNA抗体，抗Sm抗体水平不和疾病的活动性平行，亦不与SLE的任何临床表现相关，抗Sm抗体的检测对早期、不典型的SLE或经过治疗后回顾性诊断有很大的帮助。,2、抗RNP抗体 抗RNP抗体几乎见于所有混合性结缔组织病（MCTD）患者中，阳性率95%。出现高效价的抗RNP抗体且无其他特异性的抗核抗体，是诊断MCTD的重要血清学依据。但此抗体可在多种风湿病中出现，并不具有诊断特异性。 Sm和RNP是同一分子复合物（RNA-蛋白质颗粒）中的两个位点，两种抗原具有相关性，分离提纯十分困难。临床上Sm抗体阳性者常同时伴有RNP抗体阳性，单一抗Sm抗体阳性者很少见。,（3）、抗SSA和抗SSB抗体 在SLE患者中，抗SSA和抗SSB抗体阳性率分别为35%和15%：在SS患者中抗SSA和抗SSB抗体阳性率分别为60%和40%。可以看出，抗SSA抗体和抗SSB抗体与口眼干燥症有关，且抗SSA抗体敏感性高于抗SSB抗体，但抗SSB特异性则优于抗SSA抗体。抗SSA和抗SSB抗体的测定提高了SS的诊断率。,（4）、抗Scl-70（DNA拓朴异构酶-1抗体） Scl-70抗原是DNA拓朴异构酶-1（天然分子量为100KD）的降解产物，分子量70KD的抗原片段。因该抗体仅出现在进行性系统性硬皮病（Progressive Systemic Sclerosis，PSS）患者，其分子量为70KD而得名。一般未经选择的PSS患者，其阳性率为25%，而重症弥漫型硬皮病患者，其阳性率为75%。抗Scl-70抗体，在其它结缔组织病和非结缔组织病极少阳性，正常人均阴性。通常将抗Scl-70称为PSS的标记抗体。,(5)、抗Jo-1抗体 一般在多发性肌炎（PM）、皮肌炎（DM）中检测到，因此该抗体阳性是PM/DM的血清标记抗体。由于该抗体阳性的患者临床上常有关节炎，皮肌炎及肺部间质性病变的表现，因此该部分患者常因关节炎症状或肺部症状，被误诊为类风湿性关节炎或肺部感染。,抗心磷脂抗体（ACL） 抗心磷脂抗体（Anti-Cardiolipin Antibodies ACL）是抗磷脂抗体中的一个重要组成部分，可在多种结缔组织病中出现，抗心磷脂抗体可分为IgA、IgM、IgG。研究表明ACL在SLE中阳性率为30%，其次在RA中阳性率为23%，都以IgG型为主。在SLE病人当中ACL阳性者狼疮脑病的发病率明显高于ACL阴性患者，另外，血小板减少，血管栓塞和习惯性流产也与ACL抗体密切相关。,类风湿性关节炎（RA）的早期诊断 类风湿因子（Rheumatoid Factor RF）是IgGFc端的自身抗体，因为它是抗体（即IgG）的对应抗体，故也称为抗抗体。RF可以是IgG、IgA、IgM型，现在一般说的RF是指IgM类风湿因子。,RF出现于的RA病人血清中，约30%的SLE、约50%的SS，部分MCTD和少数PSS病人也可呈阳性，在某些病毒、原虫、细菌感染和肿瘤等非自身免疫病患者也可以出现。,目前，国内外常规测定的为IgM-RF，测定的方法是人IgG包被乳胶凝聚试验。其原理为IgM有5个单体，每个单体都可以和乳佼包被的IgGFC端结合而产生明显的凝聚现象，IgG类风湿因子是单体，与乳胶凝聚不明显，故需用更敏感的放射免疫法或酶联免疫法检测。,RA是一种最常见的自身免疫性疾病，在全世界大约有1%的人患有此病。是以关节滑膜炎症的慢性自身免疫性疾病，其预后变异大，轻者发生轻度关节畸形，重者则发生严重致死性病变。RA诊断和治疗晚，则疗效不满意。早期诊断和治疗，炎症有可能发生可逆性改变，这就显得RA的早期诊断极为重要。,RA的早期诊断指标有类风湿因子（RF）： 阳性率为79%，特异性为63%。抗核周因子抗体（APF) ： 阳性 率达81%，特异性为73-90%。抗角质蛋白抗体（AKA）： 阳性率为36-69%，特异性为95-99%。抗RA33抗体： 阳性率为35%，病情相对较重。,抗Sa抗体：IB法检测的敏感性为40%，特异性为99%，阳性预报率为98%。抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体：ELISA法敏感性为80%，特异性为96%。 这几种抗体都可以在RA起病一年内出现，除RF外的几种抗体对RA的诊断具有很高的特异性，故对RA的早期诊断有很大的帮助。,抗线粒体抗体（antimitochondrial antibodiesAMA） AMA是一种无种属特异性和器官特异性的自身抗体。1965年WalRer等首先应用间接免疫荧光法（IIF）发现原发性胆汁肝硬化（PBC）患者血清中存在AMA。其后研究发现，PBC患者的AMA阳性率可高达90%，此项已成为PBC诊断的主要检查项目。,AMA迄今发现的亚型共有9种（M1-M9），其中与PBC相关的有4种，即抗M2、M4、M8、M9。抗M2被认为是PBC敏感特异的诊断标志性抗体。M2靶抗原的主要成分为丙酮酸脱氢酶复合物E2组分。高滴度的AMA-M2在PBC中阳性率大于96%，对PBC的诊断及鉴别有很高的特异性。,抗中性粒细胞胞浆抗体谱（ANCA） 抗中性粒细胞胞浆抗体谱（ANCA）是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体。80年代中期发现ANCA，是临床诊断原发小血管炎的重要血清学标志。近10年来国际上对ANCA的研究进入了高潮，重要的ANCA抗原相继发现。,现已证明，ANCA存在一个自身抗体谱，其靶抗原包括：蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（MPO）人白细胞弹性a蛋白酶（HEL）乳铁蛋白（LF）组织蛋白酶G（CG）人溶酶体相关膜蛋白2（H-LAMP2）,溶菌酶（LYS）杀菌/膜通透性增高蛋白（BPI）天青杀素防御素 -浠醇酶-葡萄糖醛酸酶,间接免疫荧光（IIF）是检测ANCA最早采用的方法，应用洒精固定的白细胞制备的抗原底物片，主要表现为两种阳性荧光染色型。,胞浆型ANCA（c-ANCA）：中性粒细胞胞浆弥漫性颗粒样染色，并在核叶之间有重染者称之。其靶抗原主要是蛋白酶3（PR3），存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中，约占c-ANCA的80-90%。,PR3-ANCA在临床上与韦格纳氏肉芽肿（WG）密切相关，c-ANCA诊断WG的特异性大于90%。PR3-ANCA在其它原发性血管炎中也可被检测到，如显微镜下多血管炎（MPA）、坏死性新月体型肾小肾炎（NCGN）、结节性多动脉炎（PAN）。,核周型ANCA（p-ANCA）：中性粒细胞核周围发荧光者称之。其靶抗原主要是髓过氧化物酶（MPO），存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中，资料显示MPO-ANCA参与血管炎相关疾病的致病机理。,Bye-bye!,