血液一般检验红细胞检验ppt课件.ppt

第二章 血液一般检验,血常规检验报告单,第三节 红细胞检验,一、红细胞计数二、血红蛋白测定三、血细胞比容测定四、红细胞平均指数五、网织红细胞计数,本 节 内 容,六、红细胞沉降率测定,七、红细胞形态检查,一、红细胞计数（RBC） 红细胞计数（RBC）是测定单位容积血液中红细胞数量。 RBC与血红蛋白和血细胞比容结合，常作为诊断贫血、真性红细胞增多症及红细胞增多的主要指标之一。,（一）检测原理,显微镜法的检测原理：采用等渗稀释液将血液标本稀释一定倍数（200倍）后，充入改良牛鲍血细胞计数板中，在显微镜下计数一定区域（体积）内的红细胞数量，经换算求出每升血液中红细胞数量。,（二）操作步骤 显微镜法 准备稀释液：取一试管，加入红细胞稀释液2 ml 。采血和加血：准确采集末梢血或吸取新鲜静脉抗凝血10l ，加至上述稀释液中，立即混匀。充池：准备计数板、充分混匀稀释液、充池，室温静置23 min ，待细胞下沉。计数：高倍镜下计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。计算：,（三）方法评价,常用红细胞计数稀释液组成与作用,（四）质量保证 血细胞计数质量保证的关键是控制计数误差。血细胞计数误差可来源于技术误差、仪器误差和技术域误差，可通过减小误差进行红细胞计数的质量控制。,血细胞计数误差种类与原因,（五）参考区间 成年：男性 （4.05.5）1012/L， 女性 （3.55.0）1012/L。新生儿（6.07.0）1012/L。,（六）临床意义 1生理性变化 红细胞数量受到许多生理因素影响，但与相同年龄、性别人群的参考区间相比，一般在20%以内。,红细胞生理性变化与临床意义,2病理性变化 （1）病理性增多,（2）病理性减少：见于各种原因导致的贫血,贫血是指外周血中单位体积内血红蛋白（Hb）、红细胞计数（RBC）和（或）血细胞比容（HCT）低于参考区间下限。,病因不同可将贫血分为3大类。此外，药物也可引起贫血 。 1）红细胞生成减少：骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血、急性造血功能停滞等。造血物质缺乏或利用障碍，如肾性贫血、缺铁性贫血（铁缺乏）、铁粒幼细胞贫血（铁利用障碍）、巨幼细胞贫血（叶酸、维生素B12缺乏性DNA合成障碍）等。 2）红细胞破坏过多 3）红细胞丢失（失血）：如急性、慢性失血性贫血。,红细胞破坏过多的原因与临床意义,引起贫血的药物与机制,二、血红蛋白测定（Hb或HGB） 血红蛋白是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白。 每个Hb分子含有4条珠蛋白肽链，每条肽链结合1个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体，以利于结合O2和CO2。,（一）检测原理 HiCN法检测原理：血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在特定条件下，HiCN毫摩尔消光系数为44L/（mmolcm）。HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度可求得血红蛋白浓度。,十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）检测原理： SDS作为一种阴离子表面活性剂，具有轻度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538nm。,（二）操作步骤1、氰化高铁血红蛋白测定法（直接定量测定法）准备转化液：取一试管，加入5mlHiCN转化液。采血与转化：采集全血20l，加到盛有转化液的试管底部，与转化液充分混匀，静置5min。测定吸光度：用符合WHO标准的分光光度计，在波长540nm处、光径为1.000cm、以HiCN试剂调零，测定标本的吸光度（A）。计算 ：,2十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 制备标准曲线：取4份不同浓度抗凝血分别用 HiCN 法及本法测定每份血液的血红蛋白浓度和吸光度，以 HiCN 法测得的血红蛋白浓度为横坐标，本法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。测定：取应用液5ml于试管中，加入全血20l充分混匀。5min后置538nm下以应用液调零，测定其吸光度，查标准曲线即可得出血红蛋白浓度。,（三）方法学评价,HiCN测定法是WHO和国际血液学标准化委员会ICSH推荐的参考方法，由于HiCN试剂含有剧毒的氰化钾，各国均相继研发出不含氰化钾的血红蛋白测定方法，有的测定法已用于血液分析仪，但其标准应溯源到HiCN量值。,血红蛋白测定的方法学评价,HiCN转化液的作用与评价,（四）质量保证,（五）参考区间 成年：男性 120160 g/L， 女性 110150 g/L。 新生儿：170200 g/L。,（六）临床意义 与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数。 根据Hb浓度可将贫血分为4度：轻度贫血：Hb120g/L（女性Hb110g/L）；中度贫血：Hb90g/L；重度贫血：Hb60g/L； 极重度贫血：Hb30g/L。 当RBC1.51012/L，Hb45g/L时，应考虑输血。,三、血细胞比容测定(Hct) 血细胞比容（Hct，HCT ，PCV）是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。 HCT高低与红细胞数量、平均体积及血浆量有关，主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断，血液稀释和血液浓缩变化的测定，红细胞平均值的计算等。,（一）检测原理 HCT直接测定采用离心法，间接测定采用血液分析仪法。 1离心法 常用微量法和温氏法，其检测原理基本相同，但离心力不同。血液离心后分5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。读取结果以还原红细胞层为准，见右图。,血细胞比容结果判断,还原红细胞层,2血液分析仪法 由红细胞计数和红细胞平均体积导出HCT，HCT红细胞计数红细胞平均体积。,（二）操作步骤 1微量法 吸血：用虹吸法将血液充入专用毛细管中，至2/3(50mm)处封口：把毛细管未吸血的一端垂直插入密封胶，封口。离心：把毛细管放入专用高速离心机，以RCF12 500g离心5min。读数：毛细管置于专用读数板的凹槽中，移动滑尺刻度至还原红细胞层表层，读出相对应的数值；或用刻度尺分别测量红细胞层和全血层长度，计算其比值，即为HCT。,2温氏法 加标本：用毛细滴管吸取混匀的抗凝血，插入温氏管底部，将血液缓慢注入至刻度“10”处，用小橡皮塞塞紧管口。离心：将温氏管置于离心机，以相对离心力RCF为2264g离心30min。读数：以还原红细胞层表面为准，读取红细胞层柱高的毫米数，乘以0.01，即为HCT值。,（三）方法评价,HCT测定的方法学评价,（四）质量保证,（五）参考区间 成年：男性：0.400.50； 女性：0.370.48。新生儿： 0.470.67。儿童：0.330.42。,（六）临床意义 与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血浆量增加，为假性贫血；HCT增加可因红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致。HCT的主要应用价值为： 1临床补液量的参考 2真性红细胞增多症诊断指标 3计算红细胞平均指数的基础,HCT增高和减低的原因,四、红细胞平均指数 红细胞平均体积（MCV） 红细胞平均血红蛋白量（MCH） 红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC） 红细胞平均指数有助于深入认识红细胞特征，为贫血的鉴别诊断提供线索。,（一）检测原理 1手工法 根据RBC、Hb、HCT测定结果计算红细胞平均指数。,2血液分析仪法 MCV：由血液分析仪直接测定导出；MCH：由仪器测定HGB、RBC， MCHHGB/RBC；MCHC：HGB/（RBCMCV）。,（二）操作步骤检测RBC、Hb、HCT计算：根据RBC、Hb、HCT测定结果计算红细胞平均指数。,（三）方法评价 手工法红细胞平均指数由RBC、HGB、HCT测定后计算而来，因此，必须采用同一抗凝血标本，且所检测的结果必须准确。仪器法红细胞平均指数的测定同样依赖于RBC、HGB和MCV测定的准确性。,（四）参考区间,（五）临床意义,贫血形态学分类及临床意义,补：红细胞体积分布宽度（RDW）测定,RDW：是反映外周血红细胞体积异质性的参数，红细胞体积大小的变异系数表示。,【参考区间】11.5%14.5%,【临床意义】,（一）结合MCV用于贫血的形态学分类,贫血形态学分类,形态学分类,MCV,RDW,增高 正常 大细胞均一性贫血 部分再生障碍性贫血 增高 大细胞非均一性贫血 巨幼细胞贫血、MDS,病因,正常 正常 正常细胞均一性贫血 急性失血性贫血 增高 正常细胞非均一性贫血 再生障碍性贫血、酶缺乏等,减低 正常 小细胞均一性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血 增高 小细胞非均一性贫血 缺铁性贫血,（二）缺铁性贫血的诊断和鉴别诊断,网织红细胞,五、网织红细胞计数,网织红细胞（Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，略大于成熟红细胞，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。 ICSH将网织红细胞分为4型。,网织红细胞分形及特征,（一）检测原理 1普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构。 2血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。,（二）操作步骤 1试管法 加染液：取一试管，加入染液2滴。加血染色：注入新鲜全血2滴，立即混匀，室温下放置1520min。制备涂片：取混匀染色血1小滴制成薄血涂片，自然干燥。观察：低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好的部位。计数：常规法是在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞；Miller窥盘计数法是将Miller窥盘放置于目镜内，于Miller窥盘的小格A内计所有成熟RBC，在大格B内（含小格）计数网织红细胞数。,Miller窥盘结构示意图,计算,2玻片法 加染液：于载玻片的一端滴加10g/L煌焦油蓝乙醇溶液1滴，自然干燥后备用。加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角将血滴与染料混匀，用另一载玻片盖在此载玻片上，使两玻片粘合。制备涂片：510min后，移开上层玻片，取l小滴推制成血涂片。观察、计数和计算：同试管法。,（三）方法评价,网织红细胞计数的方法学评价,（四）质量保证 以手工计数法为重点。 1选择合适的染料 用于网织红细胞检测的活体染料很多，有煌焦油蓝（brilliant cresyl blue）、新亚甲蓝（new methylene blue）、中性红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。,网织红细胞活体染料的评价,2. 正确辨认网织红细胞 外周血液网织红细胞主要为型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。,红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别,3网织红细胞计数方法 （1）Miller窥盘法：ICSH及我国卫生部临床检验中心推荐使用Miller窥盘法（见下图）进行网织红细胞计数。（2）显微成像系统：,Miller窥盘结构示意图,高荧光强度网织红细胞（HFR）中荧光强度网织红细胞（MFR）低荧光强度网织红细胞（LFR）,ICSH建议，为控制CV在10%内，应根据网织红细胞比率，决定在连续视野中Miller窥盘小方格内实际需要计数的红细胞数量，见下表。,（五）参考区间 成人、儿童：0. 51.5。 新生儿：2.06.0。 成人绝对值：（2484）109/L。,（六）临床意义 网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要指标。 1评价骨髓增生能力，判断贫血类型 2评价疗效 3放疗和化疗的监测,常见网织红细胞参数及评价,小,六、红细胞沉降率测定 红细胞沉降率（ESR）简称血沉，是指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。,（一）检测原理 1魏氏（Westergren）法 将枸橼酸钠抗凝血置于特制的刻度血沉管内，在室温下垂直立于血沉架1h后，读取上层血浆的高度，即为红细胞沉降率。血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的高度，而并非真正红细胞沉降的速度。 2自动血沉仪法 全自动血沉仪根据红细胞下沉过程中血浆浊度的改变，采用光电比浊法、红外线扫描法或摄影法，动态分析红细胞下沉各个时段血浆的透光度，以微电脑记录并打印结果。,（二）操作步骤 1魏氏法 加抗凝剂：取浓度为109mmol/L的枸橼酸钠溶液0.4ml加入试管中。采血：采静脉血1.6ml，加入试管中，混匀。吸血：混匀全血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残留余血。立血沉管：将血沉管直立于血沉架上。读数：1h后，准确读取红细胞下沉后露出的血浆段高度，即为红细胞沉降率。 2自动血沉仪法 按仪器操作规程操作。,（三）方法评价,血沉测定的方法学评价,（四）质量保证 1ICSH规定的参考方法 可用于验证其他方法的可靠性 未稀释标本结果纠正公式为： 纠正ESR（mm/h）（未稀释标本ESR0.86）12 其结果在95%限定值范围内，表明方法满意。因ESR影响因素复杂，新方法应建立特定的自身参考区间。,ICSH参考方法与常规工作法ESR检测结果比较,2魏氏法对抗凝剂、血液标本及物理条件的要求,3质控方法 参考方法常作为常规试验的质控方法，但参考方法费时、费力，通常采用替代的稳定化全血质控品作为每日质控。 进行质控必须要满足以下条件：EDTA抗凝，HCT为0.35左右，ESR在15105 mm/h范围，检测前将标本颠倒混匀16次。,4. 血沉测定影响因素,（五）参考区间 魏氏法：男性015mm/h，女性020mm/h。 （六）临床意义 血沉主要用于观察病情的动态变化、区别功能性与器质性病变、鉴别良性与恶性肿瘤等。,1血沉加快 （1）生理性：见下表。,（2）病理性：对于疾病鉴别和动态观察具有一定参考价值。 2血沉减慢 见于真性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常等。,病理性血沉加快的临床意义,七、红细胞形态检查,（一）检测原理及方法学评价,红细胞形态检查的检测原理及方法学评价,（二）操作步骤 制备良好的染色血涂片。低倍镜观察：低倍镜下观察染色血涂片中红细胞的分布和染色情况。选择细胞分布均匀、染色良好、红细胞紧密排列但不重叠区域。油镜观察：滴加香柏油1滴，在油镜下仔细观察上述区域中红细胞的形态，同时浏览全片是否存在其他异常细胞。,（三）质量保证,红细胞形态检查的质量保证,人为原因造成的红细胞形态异常,（四）临床意义 1正常形态红细胞 正常红细胞呈双凹圆盘形，大小相对均一，平均直径7.2m（6.77.7m）。 Wrihgt染色后为粉红色或琥珀色，血红蛋白充盈良好，呈正色素性、向心性淡染。 中央部位为生理性淡染区，大小约为细胞直径的1/3。 胞质内无异常结构。,正常形态红细胞,正常形态红细胞（扫描电镜）,正常形态红细胞常见于健康人，但也可见于急性失血性贫血、部分再生障碍性贫血等。,2异常形态红细胞 在排除人为因素后，若血涂片中出现异常形态红细胞，且数量增多，常提示病理性改变。 常见的异常形态红细胞可分为红细胞大小、形状、血红蛋白含量、结构和排列异常。,红细胞大小异常的临床意义,红细胞大小不均,巨红细胞,A.小红细胞；B.巨幼红细胞；C.大红细胞；D.红细胞大小不均,红细胞形状异常的临床意义,红细胞形状异常的临床意义,球形红细胞,椭圆形红细胞,靶形红细胞,棘形红细胞,泪滴形红细胞,锯齿形红细胞,椭圆型红细胞,口形红细胞,球型红细胞,靶形红细胞,A.球形红细胞，B.镰形红细胞；C.缗钱状红细胞；D.棘形红细胞；E.靶红细胞。,A.裂红细胞，B.泪滴形红细胞；C.新月形红细胞；D.口形细胞；E.椭圆形红细胞。,锯齿形红细胞,泪滴形红细胞,红细胞形态不整,红细胞血红蛋白含量异常的临床意义,低色素性红细胞,嗜多色性红细胞,染色异常,A.正常红细胞，B.低色素性 ；C.高色素性 ；D.嗜多色性；,红细胞结构异常和排列异常的临床意义,豪焦小体,卡波环,嗜碱性点彩红细胞,红细胞缗钱状形成,有核红细胞,A.嗜碱性点彩 ，B. 染色质小体（Howell-Jollys body）；C.卡-波环；D.有核红细胞 ；E.寄生虫如疟原虫。,红细胞异常形态分类方法,总 结,1.红细胞计数的参考区间、质量控制及临床意义。2.血红蛋白方法学评价、参考区间及临床意义。3.血细胞比容检测方法学评价、参考区间及临床意义4.红细胞平均值概念、参考区间及临床意义5.红细胞体积分布宽度概念及临床意义6.ESR概念、参考区间及临床意义7.Ret、RMI、RPI概念、Ret检测原理、方法学评价、参考区间及临床意义8.红细胞形态异常分类、红细胞大小异常与血红蛋白含量异常、红细胞结构异常有哪些及临床意义。,病例【简要病史】某患，女，23岁。头晕、乏力一年，近2个月加重，伴心悸、食欲不振，大小便正常。月经史：13岁初潮，月经周期不规律 （间隔20-28天），行经期7天，月经量大。既往健康，无血液病史。【体格检查】T 36.2，R 20次/分，BP 110/70mmHg。一般情况尚可，发育正常，营养中等，面色及眼睑结膜苍白，皮肤及粘膜无出血、巩膜无黄染，浅表淋巴结未触及，胸骨无压痛。心率96次/分，心律整，无异常杂音；肺、肝、脾、四肢及神经系统未见明显异常。,【实验室检查】血常规检查：RBC 3.31012/L,网织红细胞 0.05，Hb 75.0g/L，Hct 0.24，MCV 75fl，MCH 24pg，MCHC 30g/L, RDW 16.5%, WBC 4.5109/L, PLT 120109/L。思考题： 1.初步考虑为何种疾病?为什么?,2.如何分析实验室检查结果? 3.分析其病因可能有哪些?需要同哪些疾病鉴别诊断?,4.为了明确诊断还应该做哪些实验室检查？可能会有什么病理改变？,