第二章仪器分析—高效液相色谱法ppt课件.ppt
2022/11/24,第二章仪器分析高效液相色谱法,HPLC,2022/11/24,2022/11/24,凝胶柱上加上中药提取物,2022/11/24,洗脱的效果,2022/11/24,HPLC基本组成示意图,HPLC主要由色谱柱、加压泵和检测器组成,2022/11/24,色谱柱,色谱柱是液相分离的核心部件,2022/11/24,输液泵,输液泵分单元等度泵和多元梯度泵,2022/11/24,检测器,对没有紫外吸收的物质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多,检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器,2022/11/24,进样器 手动进样器,Rheodyne 7725i几乎成了所有液相色谱仪的进样器,2022/11/24,进样器 手动进样器六通阀,2022/11/24,进样器,自动进样器可由软件完全控制,Waters 717,Agilent,2022/11/24,色谱工作站,色谱工作站就是HPLC的控制系统,外企的在数万元左右，国产的几千元。,2022/11/24,色谱工作站,工作站的两大功能1.控制仪器2.处理数据,2022/11/24,液相色谱仪器常见种类 high performance liquid chromatograph,2022/11/24,液相色谱仪（2）,2022/11/24,液相色谱仪（3）,安捷伦Agilent 1100,2022/11/24,液相色谱仪（4）,2022/11/24,液相色谱仪（5）,上海伍丰科学仪器有限公司,2022/11/24,液相色谱仪（6）,戴安公司Ultimate 3000,2022/11/24,高效液相色谱法的特点,特点：高压、高效、高速 现代药物分析最有用的工具和方法,2022/11/24,高效液相色谱法在药典中的使用,2022/11/24,高效液相图谱,各成分依次流出色谱柱，从进样到出峰的时间称为保留时间,2022/11/24,定性方法,定性: 确定成分归属，依据与对照品相比较时，相同的保留时间,2022/11/24,定量方法,外标法内标法归一法,2022/11/24,定量方法外标法,内标法对照溶液：精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。供试品溶液：再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图。,2022/11/24,定量方法内标法,内标物,2022/11/24,定量方法归一法,29,（1）吸附色谱法（2）正相色谱法（3）反相色谱法 一般反相色谱法 反相离子对色谱 反相离子抑制色谱,主要分离方法,流动相的选择,在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小),31,流动相的制备供试品和对照品溶液配制（各两份）系统适用性试验,操作前的准备,32,理论塔板数（n）：分离度（R）：,系统适用性实验：,重复性 对照溶液连续进样5次 相对标准偏差应不大于2.0%,33,拖尾因子（T）：,w0.05h为0.05峰高处的峰宽； 为峰极大至峰前沿之间的距离。,除另有规定外，T应在0.951.05之间,实例：高效液相色谱外标法测定头孢拉定含量,取含头孢拉定为94.1%和头孢氨苄为2.3%的对照品35.35mg溶解定容为50ml，取10l注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为13842558，头孢氨苄峰面积为354934；另称取头孢拉定供试品35.88mg，溶解定容为50ml，取10l注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为14158286，头孢氨苄峰面积为472368；按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量。,内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液,对照液 精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入GC仪，测定，计算,供试液 精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入GC仪，测定，计算,维生素E含量测定,按中国药典2015版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。 取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1l 注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736，内标物峰面积为238787，求维生素E的理论塔板数、维生素E与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E供试品22.68mg，内标物28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887，内标物峰面积为644911，计算供试品中维生素E的含量。,实例,2022/11/24,
