实验三不规则抗体ppt课件.ppt

实验三 不规则抗体的筛选与鉴定,什么是不规则抗体?,指血型以外的抗体，即抗和抗以外的抗体 . 也包括ABO亚型抗体，如抗A1、A2、A3等,不规则抗体有何临床意义?,引起各类免疫性输血反应缩短输入RBC的存活时间新生儿溶血病,不规则抗体筛选方法有那些?,盐水介质法间接抗球蛋白试验低离子强度介质聚凝胺法酶技术凝胶微柱法 再结吸收、放散等血清学手段，对抗 体的特异性作分析,一、不规则抗体筛选实验 -盐水法.凝聚胺法,【实验原理】应用特定的筛选细胞（1，2，3号），与被检者血清在两种介质（盐水，低离子介质凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。,【标本、试剂与器材】,1. 标本 被检者不抗凝全血；2. 试剂 符合国家标准的1、2、3号筛选谱细胞、0.9%氯化钠、凝聚胺试剂盒3. 器材 试管、滴管、记号笔、离心机等.,【操作步骤】,表 一 1 2 3待捡血清 1滴 1滴 1滴 25% 1号筛选谱细胞 1滴 25% 2号筛选谱细胞 1滴 25% 3号筛选谱细胞 1滴 1. 盐水法 按表一加样后,1000g离心15s，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录结果. 2. 凝聚胺 按表一加样后,依次加入低离子介质溶液、凝聚胺溶液, 1000g离心15s，弃上清夜,摇动试管,看是否形成凝集(如没有凝集形成需重做),加悬浮液,观察凝集是否散开,记录结果,【结果判断】,1、2、3号筛选谱细胞管出现4+凝集者为抗体筛选阳性结果。,【方法评价与注意事项】,1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体；2. 在盐水、 低离子凝聚胺介质中，1、2、3号筛选谱细胞只要有一个或一个以上管出现4+凝集，表示被检者血清中存在不规则抗体，需进一步鉴定抗体特异性；3. 无凝集，表示被检者血清中不存在不规则抗体。4.低离子凝聚胺出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。,二、不规则抗体鉴定试验-凝胶微柱法,【实验原理】对不规则同种抗体筛选试验阳性的被检者应检查其抗体特异性。根据谱细胞（1-10号共10个鉴定细胞）与被检者血清在三种介质（盐水、酶、抗人球蛋白）中反应结果加以判定。,【标本、试剂与器材】,1. 标本 被检者不抗凝全血；2. 试剂 符合国家标准的1-10号鉴定谱细胞、凝胶微柱卡；3. 器材 台式离心机、37水浴箱、血液细胞洗涤离心机。,谱细胞（Panel Cell）,由812个人份的已知血型表现型的O型RBC配套组成具有各种不同的抗原成分，分布各具特点，与抗体反应出现不同的格局能检出常见抗体和稀有抗体每种抗原在谱细胞上保持一定的阴阳比率为了证实单价抗体，使用的相应抗原RBC应为1个以上,【操作步骤】,1.向凝胶卡内依次加0.8-1% 110号鉴定谱细胞50ul,2.每孔加被检者血清25ul,3.37温15min,4.专用离心机离心10min,观察结果,【结果判断】,【方法评价与注意事项】,1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体；2. 4+凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规则抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性；3. 无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。4. 凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。,