免疫学实验10 小鼠巨噬细胞功能测定ppt课件.ppt
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免疫学实验10 小鼠巨噬细胞功能测定ppt课件.ppt
1.实验目的 了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理;熟悉和掌握巨噬细胞吞噬试验的方法。,实验10 小鼠巨噬细胞功能测定,2.实验原理,巨噬细胞具有吞噬、分泌和参与免疫应答的各种功能,是机体免疫水平和功能的重要指标,与抗肿瘤免疫也有重要关系。本试验将鸡红细胞注入小鼠腹腔时,会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色,在显微镜下观察可见鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数,可判断巨噬细胞的吞噬功能,据此可判断机体的非特异性免疫水平。,3.实验器材 (1) 器具:注射器、离心管、载玻片、平皿、烧杯、橡皮乳头、解剖剪和镊子、解剖盘。 (2) 材料:Hanks液、6%淀粉肉汤液、瑞氏染色液、 1%鸡红细胞悬液、 小鼠。,4.实验方法(小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能体内测定法)(1)实验前3d,给小鼠腹腔内注射无菌6%淀粉肉汤液1ml。 (2)实验当天,给小鼠腹腔注射1的鸡红细胞悬液1ml ,轻 揉腹部使鸡细胞分散,令其活动2030min。 (3)然后颈椎脱臼处死小鼠,仰卧固定。常规消毒腹部皮肤, 左手持镊提起腹中部皮肤。右手用剪子剪长5mm的小口, 从剪口处朝头、尾部用力,撕开皮肤,暴露腹壁。,(5)提起腹前壁,避开血管剪一小口,用毛细吸管吹吸混匀腹腔内液体,并收集于试管内。(6)在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液制作涂片 。待涂片晾干后,瑞氏染液染色5min。 (7)结果判断:高倍镜/油镜下镜检。镜下可见巨噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。计数巨噬细胞吞噬鸡红细胞情况,计算吞噬百分率和吞噬指数。 吞噬百分率:即100个巨噬细胞中吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数。 吞噬指数:将100个巨噬细胞中所吞噬的鸡红细胞总数除以100即得吞噬指数,即平均每个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞数。,未被吞噬的鸡红细胞,吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞,5.注意事项,(1)涂片的薄厚要适当,否则影响计数。(2)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。(3)如小鼠腹腔液过少,可腹腔注入适量Hanks液揉动 后再取。 (4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。(5)被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未 被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间。,