CHO细胞大规模悬浮培养流程简介ppt课件.ppt

CHO细胞培养流程简介,一 悬浮培养特点（suspension culture),非贴壁依赖型细胞的一种培养方式细胞悬浮于培养基中生长或者维持某些贴壁依赖型细胞经过适应和选择后也可用此方法培养使用振荡或者转动装置使细胞始终处于悬浮状态,二 CHO细胞大规模悬浮培养工艺流程,细胞株 摇瓶 WAVE或者种子罐 收货细胞液 反应器培养,1 细胞复苏,将水浴锅温度调至37从液氮罐中取出冻存管，用镊子夹住迅速放入水浴锅中晃动，直至完全溶解后将冻存管表面消毒转移至超净工作台内进行操作将细胞悬液转移至15ml离心管内，加入约10ml培养液，轻轻吹打混匀将细胞悬液经800-1000rpm离心5分钟，弃去上清液向细胞沉淀加入10ml培养液，吹打均匀后将细胞悬液转移至摇瓶内，加入适量培养液，开始培养,细胞复苏注意事项,注意全程无菌操作溶解冻存细胞时速度一定要快，避免缓慢升温细胞内形成冰晶，对细胞造成损伤计算合适的接种密度，一般CHO细胞培养的接种密度范围在3.0-6.0*10E5个/ml注意安全：取出冻存管时防止冻伤，同时注意有无液氮渗透进入冻存管，防止液氮迅速气化导致冻存管爆炸造成人员危险,2 摇瓶细胞传代,摇瓶细胞培养2-3天后，细胞密度增高，营养物逐渐耗尽，需要对细胞进行扩培根据细胞密度计算扩培体积当达到反应器扩培接种细胞数量要求后，停止摇瓶培养，接种至反应器进行扩培,3 反应器扩培,在超净台内将摇瓶细胞合并至接种瓶内用无菌焊接机将接种瓶管路与反应器管路无菌焊接，将细胞液打入反应器进行扩培当反应器内细胞密度达到要求后，接种至下一级反应器开始生产阶段培养,4 反应器生产阶段培养,取样补碱补料补糖收获,取样,取样瓶灭菌将取样瓶连接至反应器取样口，开始管路灭菌灭菌完成后等待管路冷却开始取样取样完成后用纯蒸汽冲洗取样管路将所取细胞液测定细胞密度、活力、pH值等参数,补碱、补糖、补料,当反应器内pH值低于6.8左右时，需要进行补碱当反应器内糖含量低于2g/L时，需要进行补糖当反应器内营养物逐渐耗尽，需要根据工艺进行补料,收获细胞液,在培养末期，细胞密度及活力都开始下降，此时应该进行细胞液的收获，收获时保证细胞活力高于60%预先准备好深层过滤膜包及管路的安装和保压将反应器降温至18左右，连接深层过滤夹具进口，开始截留细胞，收获细胞液将细胞液转入收集罐内或者与纯化进行交接,谢谢,