紫外分光光度法详解ppt课件.ppt

紫外-可见分光光度计,目录,一、基本原理二、组成结构三、分光光度计的类型四、分光光度计的使用五、注意事项,一、基本原理,采用一个可以产生多个波长的装置，通过系列分光装置，得到一束平行的波长范围很窄的单色光，透过一定厚度的试样溶液后，部分光被吸收，剩余的光照射到光电元件上，产生光电流，在仪器上可读取相应的吸光度或透光率，完成测定。,利用一定频率的紫外-可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。,溶液对光的作用示意图,光吸收遵循朗伯-比尔定律：,I0 入射光辐射强度I 透射光辐射强度T 透射比a 吸光系数 摩尔吸光系数,二、组成构成,（1）光源,光源是提供入射光的装置。要求发射连续的具有足够强度和稳定的紫外及可见光，并且辐射强度随波长的变化尽可能小，使用寿命长。可见区常用的光源为钨灯，可用波长范围为 320-1000nm在紫外区常用的光源为氢灯或氘灯，发射的连续光波长范围为 185-375nm氘灯的辐射强度大，稳定性好，寿命也长。,（2）单色器,单色器是将光源辐射的复合光色散成单色光的光学装置。一般由狭缝、色散元件及透镜系统组成。最常用的色散元件是光栅和棱镜。,棱镜根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。 由玻璃或石英制成。玻璃棱镜用于可见光范围，石英棱镜则在紫外和可见光范围均可使用。,光栅是根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。,（3）吸收池,用于盛放试液的装置一般可见光区使用玻璃吸收池，紫外光区使用石英吸收池。使用比色皿时应注意手持两侧毛边，保持清洁、透明，避免磨损透光面。盛放液体高度占四分之三。,（4）检测器,将光信号转变成电信号的装置。要求灵敏度高，响应时间短，噪声水平低且有良好的稳定性。常用的检测器有光电管、光电倍增管和光电二极管阵列检测器。,光电管能将所产生的光电流放大，可用来测量很弱的光。常用的光电管有蓝敏和红敏光电管两种。前者适用波长范围 210-625nm ；后者适用范围 625-1000nm 光电倍增管比普通光电管更灵敏，是利用二次电子发射来放大光电流。是目前高中档分光光度计中常用的一种检测器。 光电二极管阵列检测器是紫外-可见光度检测器的一个重要进展。这类检测器用光电二极管阵列作检测元件。通过单色器的光含有全部的吸收信息，在阵列上同时被检测，并用电子学方法及计算机技术对二极管阵列快速扫描采集数据，由于扫描速度非常快，可以得到三维光谱图。,（5）显示器,常用的装置有电表指示、图表指示及数字显示等。,三、分光光度计的类型,单光束分光光度计双光束分光光度计双波长分光光度计,0.575,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,单光束分光光度计,简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描,双光束分光光度计,岛津UV-2550紫外可见分光光度计,双波长分光光度计,光源,单色器,单色器,切光源,检测器,吸收池,不需要参比溶液；可以消除背景吸收干扰；适合多组分混合物、浑浊试样的定量分析，可进行导数光谱分析。价格昂贵,四、分光光度计的使用,波长扫描定量测定,波长扫描,定量测定,五、注意事项,1.开机预热15分钟左右。2.测定时应注意：参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。,3.测量条件的选择：选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.20.7读数范围内时,测量的准确度较高. 选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。,4.用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。 5.正确登记，将仪器及实验台擦干净。,紫外-可见分光光度计的优缺点,优点：灵敏度高,主要用于微量分析； 准确度高,浓度测量相对误差仅有1-3%； 操作简便、迅速，所需设备并不复杂； 应用广泛。缺点： 仅适合微量分析； 所需仪器相对昂贵。,谢谢大家！,