天然产物化学全套黄酮类化合物的提取与分离ppt课件.ppt
1,第五章 黄酮类化合物（Flavonoids）,天然药物化学,天然药化教研室主讲教师：宋少江,2,本 章 内 容,第一节 概述第二节 理化性质及显色反应第三节 提取与分离第四节 检识与结构鉴定第五节 结构研究实例,3,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。 苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取。 提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般苷的提取方法先破坏酶的活性。,4,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（一）溶剂萃取法, 利用化合物的极性,药材,水或醇-水，加热提取,提取液,浓缩，加34倍量醇,（水提醇沉法）,醇水液,沉淀（水杂）,浓缩，回收醇，加水混悬,水混悬液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚层(叶绿素胡萝卜素脂溶性成分),氯仿层(黄酮苷元),乙酸乙酯层(极性大苷元极性小的苷),正丁醇层(黄酮苷),水 层(多糖蛋白质),（系统溶剂萃取）,5,在60-70下用浓盐酸调至pH3-4，静置1hr，抽滤,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（二）碱提取酸沉淀法, 利用化合物的酸性,原理：,黄酮 碱 成盐（溶于水） 沉淀,槐花米粗粉,加水，搅拌下加入石灰乳至pH8-9，微沸30min，趁热抽滤,残渣,滤液,滤液,沉淀（粗制芦丁）,芦丁,6,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（二）碱提取酸沉淀法, 利用化合物的酸性,碱：Ca(OH)2水溶液、Na2CO3水溶液或稀NaOH溶液,（即石灰乳或石灰水）,7,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（三）炭粉吸附法, 主要用于黄酮苷的精制,药材甲醇提取物,分次加入活性炭，搅拌，静置，直至上清液无黄酮反应，过滤,吸苷炭末,滤液,依次用沸水、沸甲醇、7%苯酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱,沸水洗脱液,沸甲醇洗脱液,7%苯酚/水洗脱液,15%酚/醇洗脱液,浓缩，加乙醚萃取,乙醚层（酚）,水层（黄酮苷）,8,第三节 提取与分离,二、分离,化合物的性质,极性, 硅胶,酸性, pH梯度萃取、离子交换树脂,形成氢键的能力, 聚酰胺,分子大小, 葡聚糖凝胶,特殊结构, 金属盐络合,（如邻二酚羟基）,9,第三节 提取与分离,二、分离,（一）柱色谱法,1、硅胶柱色谱,主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。 吸附规律：极性大的物质易于被吸附 一般洗脱顺序：苷元单糖苷双糖苷多糖苷,10,第三节 提取与分离,二、分离,2、聚酰胺柱色谱,吸附原理：氢键缔合,11,下列黄酮化合物：（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱， 分别写出洗脱顺序,D,练习：,A,B,C,E,聚酰胺：D E C B A,硅胶：A B C D E,12,第三节 提取与分离,二、分离,3、葡聚糖凝胶柱色谱,常用型号：Sephadex LH-20,分离原理：,黄酮苷元 吸附作用，取决于游离酚羟基的数目（与位置无关），苷元的羟基数越多, 越难洗脱。,黄酮苷 分子筛，按分子量由大到小的顺序流出柱体。,13,第三节 提取与分离,二、分离,黄酮类化合物在Sephadex LH-20(甲醇)上的Ve/V0,苷元的羟基数越多，越难以洗脱；苷的分子量越大，连接糖的数目越多，越容易洗脱。,14,第三节 提取与分离,二、分离,3、葡聚糖凝胶柱色谱,常用洗脱剂：,（1）醇或含水醇，如 甲醇、甲醇-水、乙醇 等。（2）其它溶剂：如 丙酮-水、氯仿-甲醇 等。,进行洗脱剂更换时，要注意不同溶剂对填料的溶胀度差别不能过大。,15,7,4-二OH 7-或4-OH 一般酚OH 5-OH,第三节 提取与分离,二、分离,（二）梯度pH萃取法,适于分离酸性强弱不同的黄酮苷元,酸性：,16,第三节 提取与分离,二、分离,（二）梯度pH萃取法,样品乙醚液,5%NaHCO3,碱液（7,4-二羟基黄酮）,乙醚液,5%Na2CO3,碱液（7或4-羟基黄酮）,乙醚液,0.2%NaOH,碱液（一般羟基黄酮）,乙醚液,4%NaOH,碱液（仅含3-OH或5-OH黄酮）,乙醚液（脂杂）,17,练习：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下：,第三节 提取与分离,二、分离,试比较四种化合物的酸性：极性大小：比较它们的Rf值大小顺序： （1）硅胶TLC （2）聚酰胺TLC,A R1 = R2 = H B R1 = H, R2 = Rha C R1 = Glc, R2 = HD R1 = Glc, R2 = Rha,D C B A,A C B D,A B C D,D B C A,18,第三节 提取与分离,二、分离,（三）根据分子中某些特定官能团进行分离,如：醋酸铅沉淀法（目前已不使用）,具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀,
