大肠菌群检测(平板计数法)ppt课件.ppt

大肠菌群检验平板计数法,平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。,适用范围与培养基,检样25g(ml)+225ml稀释液，均质,10倍系列稀释,选择23个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板,计数典型和可疑菌落,361,1824h,BGLB肉汤证实试验,361,1824h,报告结果,注：VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)又称为：VRB或VRBL,平板计数法流程图,GB 4789.3-2016（第二法）,平板计数法操作,菌落数在15-150之间的平板,计数典型和可疑菌落,361 18h 24h,挑选10个菌落分别接种到BGLB,典型菌落为紫红色周围有红色胆盐沉淀环，0.5mm,配方(g/L):蛋白胨:7.0; 酵母粉:3.0;乳糖:10.0;3号胆盐:1.5;中性红:0.03;结晶紫:0.002;氯化钠:5.0; 琼脂:15.0;pH 7.40.1,25其中蛋白胨提供氮源；酵母粉提供生长促进因子和族维生素；乳糖提供碳源，大肠菌群发酵乳糖，产生酸性物质；号胆盐是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌；结晶紫也是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌和一部分革兰氏阴性菌；中性红是一种指示剂，在酸性条件显红色，碱性条件下显无色。氯化钠维持细菌生长时的渗透压。琼脂是一种凝固剂。,VRBA琼脂,选择菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。,平板菌落数的选择,一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型菌落不符合的菌落。另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本来大肠菌群的定义是发酵乳糖，但由于样品含有的其他糖类混入了培养基，使得不能分解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长出红色菌落，所以需要进行证实实验。,什么样的菌落必须要做证实试验,经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为： 1006/10104/g(mL)=6.0105cfu/g(mL),结果报告,