地中海贫血的分子基础及产前诊断ppt课件.ppt
地中海贫血的分子基础及产前诊断,中山大学附属第一医院胎儿医学中心黄 轩,中国南方地中海贫血人群携带率,Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5.,地贫携带者筛查及产前诊断流程,人类血红蛋白结构,血红蛋白(Hemoglobin, Hb)是人体红细胞内的一种主要蛋白质，由珠蛋白和血红素结合而成，通过携氧释氧实现氧气在人体内的运输。,血红蛋白是由两条珠蛋白链(、)和两条非珠蛋白链(、)组成的四聚体。,人类珠蛋白肽链的发育演变,Hb Gower1: 22Hb Gower2: 22Hb Portland: 22,HbF: 22HbA2: 22HbA: 22,: elta /i:t/ ：rho /rou/ : gamma : delta,成人血红蛋白成分,正常成人血红蛋白的主要成份 HbA (22) 96.5%-97.5%HbA2 （22） 2.5%-3.5%正常成人中次要血红蛋白均匀分布所有红细胞中其生理功能特性和HbA几乎一致漫长人类进化史上没有被淘汰HbF （ 22 ） 1% 由于链有G和A两种亚型，所以HbF也有两种构成：2G2和2A2 。,胎儿血红蛋白（HbF),是胎儿和新生儿血液中的主要血红蛋白脐血中HbF 70%-80%出生后很快减少，至6个月后绝大部分被HbA替代许多性质与HbA不同具有明显的抗碱性和抗酸性（酸洗脱法）抗原性较HbA大氧亲合力较HbA大HbF增高的疾病HPFH、-地贫-地中海贫血、 -地贫复合其他地贫Hb LeporeHbS病Fanconi贫血F细胞（有些RBC的HbF含量10%-30%，称为F细胞）并非所有的红细胞均含有HbF多数不含有HbFG/ A脐血中：7：3出生头几个月：3：2出生六个月后：4：6,血蛋白病的定义及分类,异常血红蛋白病： 由于血红蛋白发生结构上的异常而导致的贫血症 比如：镰刀型细胞贫血病（HbS）、HbC、HbD、HbE等,地中海贫血： 由于某类血红蛋白合成受到抑制所引起的溶血性贫血 比如: -地中海贫血、-地中海贫血,血红蛋白病由于血红蛋白在质量和数量上的异常而发生的一类遗传性贫血病,异常血红蛋白病,镰刀型细胞贫血病（HbS）6 Glu volHbC 6 Glu LysHbD 121 Glu GlnHbE26 Glu Lys,地中海贫血,Thalasso即是“海”的意思Hemia即是“血”的意思指“海洋性贫血”,Thalassemia,希腊语1925年，意大利第一例,地中海贫血的临床血液学分类,-地中海贫血静止型-地贫标准型-地贫HbH病Hb Bart，s胎儿水肿病-地中海贫血轻型-地贫中间型-地贫重型-地贫少见的地中海贫血-地中海贫血-地中海贫血（）0-地贫遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症（HPFH）与异常血红蛋白病相互作用的地贫-地贫+ -链变异体-地贫+ -链变异体,HPFH,-地中海贫血及-地中海贫血,其他,HPFH定义,当成人体内持续存在过量的HbF时,就称： 遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症 ( Hereditary persistence of fetal hemoglobin, HPFH)没有定义HbF达到多少的比例是一组遗传异质性很大的血红蛋白病一般情况下是一个没有贫血的“正常人”血红蛋白量及红细胞大小均正常或接近正常珠蛋白链与非珠蛋白链维持正常的合成平衡注意与（）0-地贫、 -地贫鉴别,Pedigree for -thalassemia in a typical family.,地中海贫血: 常染色体隐性遗传病,地中海贫血的血液学表型特征 RBC 参数 MCV MCH 细胞形态变化 Hb电泳分析 Hb A2 () 或 () Hb Barts Hb H () Hb E (),血红蛋白电泳图谱,1 2 3 4 5,1. 正常人HB2. 轻型地贫 3. 异常HB E 杂合子4. 新生儿HB Barts (地贫标准型）5. HB H,Normal AA2 AE Barts AF HA,+,-,500V, 25min,-50kb -10kb 0kb 10kb 20kb 30kb,(-SEA) Deletion (- 4.2) Deletion (- 3.7) Deletion,2 1,导致地贫的不同类型的基因缺失,Different point mutations reducing globin gene expression,Rund. & Rachmilewitz. N. Engl. J. Med. 2005, 353:1135-46.,地中海贫血的产前诊断, 胎儿取样技术 DNA诊断技术 -地贫的诊断 -地贫的诊断, 植入前基因诊断 Preimplantation genetic diagnosis(PGD) 超声产前诊断 Prenatal diagnosis: Ultrasound measurement 母体外周血分离胎儿细胞进行产前诊断 Prenatal diagnosis: Fetal cells in the maternal circulation 母体血浆或血清中胎儿DNA分析 Analysis of fetal DNA in maternal plasma and serum,目前及今后的胎儿产前诊断新技术,DNA诊断技术, 多重PCR （multiplex PCR） 等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO） 反向点杂交 （RDB） 变性高效液相色谱（DHPLC） 基于微孔板 (microtiter well-based ) 高通量检测 实时PCR (real-time PCR),-50kb -10kb 0kb 10kb 20kb 30kb,(-SEA) Deletion (- 4.2) Deletion (- 3.7) Deletion,2 1,导致地贫的不同类型的基因缺失,Location of primers and detection of -SEA deletion by gap-PCR,Genotyping of the-SEA alleles by Gap-PCR,寡核苷酸探针杂交技术,ASO探针检测 -地贫基因诊断结果,RDB analysis: application to rapid prenatal diagnosisfor eight thalassaemia mutations.,GenotypeFather CDs41-42 (CTTT) / N MotherIVS-2-654 (CT) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N,思 考,-地中海贫血一定不能用铁剂治疗吗？HbA2升高只提示-地中海贫血吗？HbH病是否需要引产？,思 考,为何重型-地中海贫血比重型-地中海贫血更重？胎儿重型-地中海贫血能否通过血红蛋白电泳诊断？,
