化学发光免疫检测课件.ppt

化学发光免疫检测,化学发光免疫检测化学发光免疫检测学习目标化学发光检测的分类及原理了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理,化学发光免疫检测化学发光免疫检测化学发光免疫检测学习目标化学,学习目标,化学发光检测的分类及原理了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理,学习目标化学发光检测的分类及原理,酶促化学发光,01,辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（ALP）,吖啶酯发光 异鲁米诺发光 电化学发光,直接化学发光,02,化学发光免疫检测分类,酶促化学发光01辣根过氧化物酶（HRP）吖啶酯发光直接化学发,1. 酶促化学发光,HRP,辣根过氧化物酶常用的底物为鲁米诺或其衍生物,碱性磷酸酶常用的底物为AMPPD和4-MUP,ALP,酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶HRP和ALP,1. 酶促化学发光HRP辣根过氧化物酶碱性磷酸酶ALP酶促,鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应,+N2 + H2O + 光,1. 酶促化学发光,鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应鲁米诺H2O2,AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有230min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，1560min内光强度保持相对稳定,1. 酶促化学发光,AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的,利用酶对发光底物催化作用而直接发光，通过光强度的测定而直接进行定量。,1. 酶促化学发光,反应原理图,利用酶对发光底物催化作用而直接发光，1. 酶促化学发光反应,1. 酶促化学发光,特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS 2、 DXI800,1. 酶促化学发光特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易,1. 酶促化学发光,代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图Autolumo A2000,1. 酶促化学发光代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图Aut,2. 直接化学发光,不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质,反应迅速,1,背景低,2,信比高,3,2. 直接化学发光不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能,吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见，特点发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。,吖啶酯,+ CO2+ 光,吖啶酯化学发光,吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见,吖啶酯发光,代表仪器：拜耳公司的ACS180 西门子的ADVIA Centaur 雅培的ARCHITECT,吖啶酯发光代表仪器：拜耳公司的ACS180,+ NaOH + H2O2 发光 激发底物1 激发底物2,delay 2.5s,delay 0.1s,异鲁米诺发光,原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点,delay 2.5s delay 0.1s异鲁米诺发光原理：,异鲁米诺发光,代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业MAGLUMI 2000/4000,异鲁米诺发光代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业M,是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质特点：反应在电极进行； 电子供体为：三丙胺（TPA） 化学发光剂：三联毗啶钌,三联毗啶钌分子结构图,电化学发光,是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质三联毗啶钌电化,电化学发光反应原理,底物：三联吡啶钌Ru(bpy)2+3、三丙胺(TPA),这一过程可在电极表面周而复始地进行， 产生许多光子，使光信号增强,电化学发光反应原理底物：三联吡啶钌Ru(bpy)2+3、,电化学发光,代表仪器：罗氏e601、e411,电化学发光代表仪器：罗氏e601、e411,进口全自动化学发光仪,进口全自动化学发光仪仪器型号cobas e601ARCHI,国产全自动化学发光仪,国产全自动化学发光仪企业仪器型号发光机制测试速度测试项目数迈,测试题与讨论,酶促化学发光是发光底物经 的降解作用而发出光,常用的酶有： 和 。雅培ARCHITET i2000采用 标记的标记分子，专利的 衍生物，具有更高的发光效率以及稳定性。,测试题与讨论酶促化学发光是发光底物经 的降,谢谢！,谢谢！,