KJ01沙门氏菌检验课件.ppt
沙门氏菌及其检验,一、概述 在微生物分类学中，沙门氏菌属（Salmonella）是肠杆菌科的一个大属，包括2000多个血清型，它们在形态结构、培养特性、生化特性和抗原构造方面都非常相似，是一类形态短小的革兰氏阴性杆菌，主要寄居于人和其它温血动物的肠道中，可引起多种性质的疾病，根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌,甲型、乙型、丙型副伤寒沙门氏菌。第二类群：能引起人类食物中毒，称之为食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌，此类群中尽管很少感染人，但近年也有感染人的报道。,1,沙门氏菌及其检验一、概述1,根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同，在临床上引起四种不同的疾病:（1）伤寒、副伤寒 由沙门氏属中的伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。（2）食物中毒 沙门氏菌属引起的食物中毒，主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短，一般24d, 可完全恢复。（3）败血症 多为猪霍乱杆菌引起，甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引起败血症。（4）慢性肠炎 沙门氏杆菌可引起慢性、持久性肠炎。,2,根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同，在临床上引起四种不同,沙门氏菌广泛分布于自然界，是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中，沙门氏菌常居前列。因此，沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。 沙门氏菌不产生外毒素，但能产生毒力较强的内毒素。 沙门氏菌主要通过食物、饮水经口感染。可存在多种食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和田鸡腿等。,3,3,二、沙门氏菌的生物学特性 1、形态与染色特性：革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,一般无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数具有菌毛。2、培养特性：需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。,4,二、沙门氏菌的生物学特性 4,3、生化特性：大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气；一般不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇；一般不产吲哚，V-P反应阴性；不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨；三糖铁琼脂斜面常产生H2S。4、抵抗力：较弱，不耐热，最适温度37，最适pH6.8-7.8。5、毒素特征：不产外毒素，产毒性很强的内毒素，这是致病的主要原因。,5,3、生化特性：5,6、血清学特性： 沙门氏菌具有复杂的抗原结构。虽然沙门氏菌具有O、H、K和其它表面物质(如菌毛)四种抗原，但只有O抗原是每个菌株均有的成分。1）O抗原（菌体抗原）*存在于菌体表面，为脂多糖，多糖部分决定其特异性，*O抗原耐热(100、2.5h或121、2h加热均不破坏其抗原性)，其特异性不易丧失或变异。*一个菌体具有一种或多种不同的O抗原。,6,6、血清学特性：6,2）H抗原（鞭毛抗原）*H抗原存在于鞭毛中，不耐热，化学成分蛋白质，其抗原性可以被酒精所破坏。*H抗原可分为两相第1相：为特异相，用小写英文字母表示，az，Z以后则从z1、z2，已编到z83。第2相：为非特异相以阿拉伯数字表示，共7种。具有第1相和第2相H抗原的细菌称为双相菌，大多数沙门氏菌属于此；仅有一相者称单相菌，如肠炎沙门氏菌。极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有，称为无相菌，如鸡白痢沙门氏菌。,7,2）H抗原（鞭毛抗原）7,3） Vi抗原（包膜抗原） 少数菌沙门氏菌中尚有一种表面包膜抗原，功能与大肠杆菌的K抗原类同，因一般认为它与毒力(Virulence)有关，故称Vi抗原。 经过几次传代、60热处理或石炭酸处理后容易消失。,8,3） Vi抗原（包膜抗原）8,三、 生化反应,9,三、 生化反应9,1、吲哚试验( indol test)细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸 吲哚（无色）对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌）试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。应用：用于肠道杆菌的鉴定,10,1、吲哚试验( indol test)10,Indol test 吲哚试验tryptophan色氨酸indole吲哚玫瑰吲哚 Kovacs reagent吲哚试剂 （对二甲基氨基苯甲醛）,- +,E.coli,蛋白胨水试管,11,Indol test 吲哚试验 -,2、尿素酶（Urease，脲酶）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色 红色（+ 普通变形杆菌） 黄色（- 大肠杆菌）试验方法：挑取1824h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于361培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。,12,2、尿素酶（Urease，脲酶）试验12,Urease Test 尿素酶试验：,urea尿素,ammonia氨,13,Urease Testurea尿素ammonia氨1,3、氨基酸脱羧酶的测定,有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37培养4天观察。当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。,14,3、氨基酸脱羧酶的测定 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出,15,15,4、三糖铁（TSI）琼脂试验,试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置361培养1824h，观察结果。培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。,16,4、三糖铁（TSI）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑,17,17,5、-半乳糖苷酶（ONPG）的测定,ONPG: 邻硝基酚-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的 细菌，能使其水解，从而释放黄色的邻硝基酚,ONPG试验左为阳性（黄） 右为阴性对照,18,ONPG: 邻硝基酚-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的,四、检测方法,19,四、检测方法19,从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通常采用的方法共分5个步骤：前增菌：食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。（选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品不必经过前增菌而直接增菌。选择性平板分离：采用固体选择培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。生物化学筛选：排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。血清学技术鉴定培养物菌种。,20,从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通常采用的方法,中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003,冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品,鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品,TSI（排除A/A H2S结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸,H2S 靛 尿KCN 赖（或一项不符）,沙门氏菌血清学试验,甘露醇+ 山梨醇+,H2S 靛 尿KCN 赖,H2S 靛 尿KCN 赖/,非如左述的各种反应结果,沙门氏菌血清学试验,ONPG ,沙门氏菌,非沙门氏菌,21,中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏,22,22,23,23,24,24,反应序号A2： 补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结果：,反应序号Bl： 补做ONPG。若ONPG（），为大肠埃希氏菌，若ONPG（），为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸（），但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸（）。,25,反应序号A2： 补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结,
