IGF-Ⅱ基因启动子甲基化状态与肝癌发生关系研究课件.ppt
IGF-基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究,钱静 姚登福南通大学附属医院临床医学研究中心,IGF-基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究,研究背景,肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关流行病调查，我国目前约9 300万乙肝病毒携带者，约4 000万丙型肝炎病毒感染者。预后差，5年生存率约11%。,研究背景肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关,原癌基因激活抑癌基因失活,肝癌,表观遗传学DNA甲基化组蛋白修饰染色体重塑,肝癌发病机制,遗传学原癌基因激活抑癌基因失活肝癌表观遗传学肝癌发病机制,DNA 甲基化原理,DNA甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上,DNA 甲基化原理DNA甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞,胰岛素样生长因子（IGF-）,IGF-是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。 IGF-在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达,但出生后基因迅速降低直至关闭,肝细胞癌变时IGF2 呈胚胎性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤细胞增生及分化。,胰岛素样生长因子（IGF-）IGF-是一种与肿瘤形成密,IGF-基因启动子甲基化状态与肝癌发生关系研究课件,IGF-基因启动子与基因表达的关系,P2,IGF-基因启动子与基因表达的关系E1E2E3E4E5E6,IGF-信号途径与肝癌,IGF-,IGF-,IGF-信号途径与肝癌IGF- IRSSHCpppppp,实验目的,本研究动态观察鼠肝细胞癌变过程中IGF-基因启动子甲基化状态改变及其与IGF-基因表达的关系； 同时分析人不同肝组织中IGF-基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系，探讨IGF-启动子甲基化状态改变在HCC形成中的作用机制。,实验目的,材料和方法,以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）鼠诱发肝细胞癌变，通过病理组织学方法（HE染色）观察肝细胞形态学动态变化； 以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测鼠IGF-基因P2甲基化状态；以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测鼠外周血和肝组织IGF-基因的蛋白表达水平； 以MSP检测人类肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织IGF-基因P3甲基化状态。,材料和方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA,图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色200）A：正常；B：早期；C：中期；D：晚期,结果与讨论,图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色200）,图2 癌变过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分析M：甲基化；U：非甲基化；1：正常肝；2：变性肝；3：癌前肝；4：癌变肝；5：部分甲基化,图2 癌变过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分,表1 诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态观察,表1 诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态观察,表2 诱癌过程中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析,1、Pearson相关显示，鼠肝和血IGF-蛋白浓度呈正相关（r = 0.97，P = 0.000）2、Spearman相关显示，IGF-P2去甲基化与外周血（rs = -0.89，P = 0.000）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（rs = 0.84，P = 0.000）,表2 诱癌过程中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析1、Pe,图3 人肝癌组织IGF-基因P3CpG岛甲基化电泳图谱U: 非甲基化；M：甲基化；T: 癌；NT：癌旁；N: 正常肝；m: marker,图3 人肝癌组织IGF-基因P3CpG岛甲基化电泳图谱,表3 人肝癌组织中IGF-基因P3甲基化率比较,表3 人肝癌组织中IGF-基因P3甲基化率比较,表4 癌旁组织IGF-P3甲基化的临床病理学特征,表4 癌旁组织IGF-P3甲基化的临床病理学特征,结 论,1. 随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲基化率逐步降低，甲基化状态的改变贯穿肝细胞癌变过程，这有助于探讨肝癌发病机制。2. IGF-基因启动子的去甲基化状态改变与蛋白表达水平呈现显著正相关，基因的去甲基化调控基因表达上调而导致蛋白水平增高，参与肝细胞癌变。3. IGF-II启动子CpG岛甲基化程度与HBV感染与否密切相关，而这对于HBV相关肝细胞癌发生的监测/预测具有潜在的应用前景。,结 论1. 随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲,E-mail:,Thanks for your attention!,E-mail:Thanks,
